眾所周知細(xì)胞培養(yǎng)基的種類繁多，細(xì)胞培養(yǎng)方式也較多，如何正確地使用培養(yǎng)基及*大程度地保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)以維持細(xì)胞的生長，對每個培養(yǎng)者都很重要。培養(yǎng)基的使用依不同的培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)方式、細(xì)胞種類的不同而存在差異。
在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作之前呢，我們先來了解一些細(xì)胞的基本知識吧！
組織培養(yǎng)實(shí)際的保存會影響培養(yǎng)物的生長速度！
動物血清應(yīng)儲存于–5至–20°C。培養(yǎng)基儲存于2至8°C；請?jiān)谕扑]的保質(zhì)期內(nèi)用完。請將完全培養(yǎng)基（加入添加劑）保存于2 至 8°C，推薦的存放期限為2至4周。此外，盡量減少血清和培養(yǎng)基暴露于光線下的時間。
細(xì)胞培養(yǎng)過程*重要的有兩點(diǎn)：一是無菌無污染；二是穩(wěn)態(tài)環(huán)境。
無菌操作：無菌操作很重要，這對細(xì)胞培養(yǎng)影響很大。不要以為加入雙抗或三抗就可以了。雙抗或三抗的添加不僅對細(xì)菌或真菌的耐受性增加了，更容易染菌。其次抗生素添加的含量對細(xì)胞生命代謝是有一定的毒性作用的，尤其是在做轉(zhuǎn)染的時候。
那么無菌操作該怎么做才能盡可能的防止被污染？
首先是超凈工作臺的擺放已以及及時滅菌。里面應(yīng)盡可能少擺放一些沒用的東西，比如槍頭、離心管等。工作臺內(nèi)右邊擺放一瓶75%的酒精，左邊擺放一包無菌擦拭紙，15ml和50ml兩個管架，正前方擺放各量程的移液槍，以及一盞酒精燈。每次使用前后均用75%酒精噴灑，擦手紙擦拭，紫外含臭氧滅菌30min。
其次是操作過程的細(xì)節(jié)注意。將培養(yǎng)基經(jīng)過75%酒精擦拭后放入工作臺的左邊，垃圾桶噴灑75%酒精后放在*右邊，槍頭噴灑75%酒精放于右中間，含有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶75%酒精擦拭后放置于左中間，將酒精燈放于正中間并點(diǎn)燃，培養(yǎng)瓶打開過火放于酒精燈旁開始傳代或換液等操作。整個過程盡可能靠近火源，以*快的速度操作完。
*后培養(yǎng)箱每隔一段時間進(jìn)行清洗消毒滅菌操作，保證培養(yǎng)環(huán)境無菌。
穩(wěn)態(tài)環(huán)境的培養(yǎng)：培養(yǎng)基和血清的的選擇很重要，一般能用進(jìn)口盡量選擇進(jìn)口的。國內(nèi)很多產(chǎn)品處理的效果不如國外的，對于原代細(xì)胞培養(yǎng)尤為重要。買來的培養(yǎng)基和血清應(yīng)及時分裝以保證無菌。切勿使用37℃水浴加熱，應(yīng)在4℃冰箱慢慢融化，避免影響血清的質(zhì)量。血清*好使用胎牛血清，添加含量為10%，不宜過高，短時間可以，長時間容易毒害細(xì)胞造成細(xì)胞分化和衰老。
細(xì)胞培養(yǎng)過程不能過于頻繁換液，應(yīng)隔3天左右更換或者培養(yǎng)基顏色變黃，所以應(yīng)每天都去觀察細(xì)胞生長的狀態(tài)，及時處理。
拿到P19-CAG-tTA-1D3細(xì)胞細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么？
收到P19-CAG-tTA-1D3細(xì)胞細(xì)胞后先不要開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察P19-CAG-tTA-1D3細(xì)胞細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議對收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況。
收到P19-CAG-tTA-1D3細(xì)胞細(xì)胞時如無異常情況，請?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度：如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，剩余培養(yǎng)液可與新配制的培養(yǎng)液按一定的比例混合使用，待細(xì)胞生長穩(wěn)定后可替換成新配制的培養(yǎng)液；超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
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