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IF4B7小鼠雜交瘤細(xì)胞
貨號(hào):BY-1174
品牌:其它品牌
規(guī)格:T25瓶
目錄價(jià):詢價(jià)
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IF4B7 小鼠雜交瘤細(xì)胞概述

基本概念與來(lái)源

IF4B7 小鼠雜交瘤細(xì)胞是通過細(xì)胞融合技術(shù)制備的一類永生性細(xì)胞系,通常由小鼠 B 淋巴細(xì)胞(如經(jīng)抗原免疫的脾細(xì)胞)與骨髓瘤細(xì)胞融合而成。這類細(xì)胞兼具 B 淋巴細(xì)胞分泌特異性抗體的能力和骨髓瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性,是單克隆抗體制備的核心工具。

生物學(xué)特性

  1. 細(xì)胞形態(tài)與生長(zhǎng)特性
    • 顯微鏡下觀察,IF4B7 細(xì)胞通常呈圓形或橢圓形,懸浮生長(zhǎng)或輕度貼壁,細(xì)胞大小均勻,核質(zhì)比高,分裂旺盛時(shí)可見多核或雙核細(xì)胞。
    • 適宜培養(yǎng)條件為 37℃、5% CO?的濕潤(rùn)環(huán)境,使用含 10% 胎牛血清(FBS)的 RPMI 1640 或 DMEM 培養(yǎng)基,傳代周期約 24~48 小時(shí),密度需維持在 1×10?~1×10? cells/mL 以保持活性。
  2. 抗體分泌功能
    • 該細(xì)胞系分泌的單克隆抗體具有高度特異性,可識(shí)別某一抗原的特定表位。其抗體類型(如 IgG、IgM 等)和亞類需通過亞型鑒定試劑盒確定,這對(duì)后續(xù)應(yīng)用(如免疫熒光、ELISA 等)至關(guān)重要。
    • 抗體產(chǎn)量受培養(yǎng)條件影響顯著,優(yōu)化培養(yǎng)體系(如添加細(xì)胞因子、使用無(wú)血清培養(yǎng)基)可提高分泌效率。

制備與鑒定流程

  1. 制備步驟
    • 免疫小鼠:用目標(biāo)抗原免疫 BALB/c 小鼠(通常為 6~8 周齡),誘導(dǎo)脾細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體分泌細(xì)胞。
    • 細(xì)胞融合:取免疫小鼠脾臟,制備單細(xì)胞懸液,與骨髓瘤細(xì)胞(如 SP2/0 或 NS0 細(xì)胞)在聚乙二醇(PEG)介導(dǎo)下融合。
    • 篩選與克隆化:通過 HAT 培養(yǎng)基篩選融合成功的雜交瘤細(xì)胞,再經(jīng)有限稀釋法克隆化,獲得單一克隆的 IF4B7 細(xì)胞。
  2. 鑒定內(nèi)容
    • 抗體特異性:采用 ELISA、Western blot 或免疫組化驗(yàn)證抗體與目標(biāo)抗原的結(jié)合能力。
    • 細(xì)胞穩(wěn)定性:連續(xù)傳代 20 代以上,檢測(cè)抗體分泌一致性及核型穩(wěn)定性(如染色體數(shù)目分析)。
    • 微生物污染:通過支原體檢測(cè)、細(xì)菌 / 真菌培養(yǎng)確保細(xì)胞無(wú)污染。

應(yīng)用領(lǐng)域

  1. 單克隆抗體制備
    • IF4B7 細(xì)胞可用于生產(chǎn)科研或臨床診斷用單克隆抗體,例如腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)、病毒抗原識(shí)別等。其分泌的抗體可進(jìn)一步純化(如 Protein A/G 親和層析),用于免疫治療或生物制藥。
  2. 基礎(chǔ)研究工具
    • 在細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究中,該細(xì)胞系分泌的抗體可作為工具試劑,用于抗原定位、信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制研究等。例如,若抗體靶向某一癌基因產(chǎn)物,可用于腫瘤細(xì)胞增殖機(jī)制的探究。
  3. 生物制藥與診斷開發(fā)
    • 在體外診斷(IVD)領(lǐng)域,IF4B7 細(xì)胞分泌的抗體可用于開發(fā) ELISA 試劑盒、化學(xué)發(fā)光試劑等;在靶向治療中,其抗體可作為抗體 - 藥物偶聯(lián)物(ADC)的載體部分。

培養(yǎng)與保存注意事項(xiàng)

  1. 培養(yǎng)基優(yōu)化
    • 避免血清批次差異影響細(xì)胞生長(zhǎng),建議使用同一品牌血清。若需無(wú)血清培養(yǎng),需逐步適應(yīng)并添加胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白等替代因子。
  2. 傳代與凍存
    • 傳代時(shí)避免細(xì)胞密度過高導(dǎo)致凋亡,建議按 1:3~1:5 比例稀釋。凍存時(shí)使用含 10% DMSO 的胎牛血清,程序降溫至 - 80℃后轉(zhuǎn)入液氮保存,復(fù)蘇存活率應(yīng)高于 85%。
  3. 質(zhì)量控制
    • 定期檢測(cè)細(xì)胞活性(臺(tái)盼藍(lán)染色)、抗體滴度(間接 ELISA)及 STR 分型(身份驗(yàn)證),防止細(xì)胞交叉污染或遺傳漂變。

挑戰(zhàn)與展望

雜交瘤細(xì)胞系的長(zhǎng)期培養(yǎng)可能面臨抗體分泌能力下降或遺傳不穩(wěn)定等問題,可通過低溫保存原始克隆、定期克隆化培養(yǎng)維持特性。隨著基因編輯技術(shù)(如 CRISPR/Cas9)的發(fā)展,未來(lái)可對(duì) IF4B7 細(xì)胞進(jìn)行工程化改造,例如敲入熒光標(biāo)記基因或增強(qiáng)抗體親和力,進(jìn)一步拓展其應(yīng)用場(chǎng)景。

總之,IF4B7 小鼠雜交瘤細(xì)胞憑借其穩(wěn)定分泌特異性抗體的特性,在生命科學(xué)研究和生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)中具有不可替代的作用,其標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)與功能優(yōu)化仍是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。
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