●半定量●:是將各樣品目的蛋白量分別除以其內(nèi)參含量,得到的數(shù)值即為內(nèi)參校正后的各樣品中目的蛋白相對含量,再用此數(shù)值進行樣品間的比較和分析,得到目的蛋白含量在不同樣品間的實際變化結(jié)果,是一個比值差異的統(tǒng)計學(xué)分析。 ●內(nèi)部參照●:內(nèi)參即是內(nèi)部參照(Internal Control),對于哺乳動物細胞表達來說一般是指由管家基因編碼表達的蛋白(Housekeeping Proteins),它們在各組織和細胞中的表達相對恒定,在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物,借助檢測每個樣品內(nèi)參的量就可以用于校正上樣誤差,這樣半定量的結(jié)果才更為可信。
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●使用 RIPA 提取的總蛋白總結(jié)●: 1. 并非是真正意義上的總蛋白,相當一部分蛋白丟失在棄去的不可溶組分中。 2. 很多常用的內(nèi)參,如 Actin,tubulin,LaminA,H3 等均在 RIPA 不可溶組分中被丟失。 3. 目標蛋白可能會在 RIPA 不可溶組分中被丟失,也可能不被丟失,具有不可預(yù)見性,非選擇性。 4. 同種蛋白在不同樣品中丟失的情況并不相同,蛋白丟失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和內(nèi)參比值做校正會出現(xiàn)偏差,不適合 WB 目的蛋白的半定量分析。
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